Fura-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針，超級純

（zui經典的紫外激發(fā)比率型鈣離子探針）

【務必注意】：初次使用離子探針的用戶，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養(yǎng)級（MS4301-1G）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內加載性。 

搜索關鍵詞：

Fura-2, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針，超級純；Fura-2, Acetoxymethyl Ester; 紫外光激發(fā)Ca²⁺熒光探針；比率測定型（ ratiometric fluorescent dye）；Fluo-3；Indo-1, AM；CAS NO：108964-32-5；

產品信息：現(xiàn)貨供應，高純品質。

【溫馨提示】：見我司整理的鈣離子熒光探針產品專題。

基本介紹：

Fura-2是一種常用的紫外光激發(fā)和比率測定型Ca²⁺熒光探針。一旦與Ca²⁺結合后，Fura-2的最大激發(fā)波長發(fā)生藍色遷移，由原來的363nm（Ca²⁺-free）遷移到335nm（Ca²⁺-saturated），而最大發(fā)射波長基本未變化，保持在510nm左右。通常情況，分別用最大激發(fā)波長340nm和380nm來激發(fā)Fura-2，且用340/380nm激發(fā)下的熒光比值來檢測細胞內Ca²⁺濃度。使用比值檢測，可消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，探針的滲漏，細胞厚度差異等因素導致的檢測誤差。Fura-2自1985年合成以來，廣泛用于各種細胞系統(tǒng)和生化用途，特別是數(shù)字顯微成像。單波長檢測，Fura-2與Ca²⁺結合后，推薦用最大激發(fā)和發(fā)射波長分別為340nm和510nm；雙波長檢測，則推薦用最大激發(fā)和發(fā)射波長分別為340nm和380nm；
Fura-2, AM是Fura-2的一種乙酰甲酯衍生物，具有細胞膜滲透性，只需簡單培養(yǎng)，即可輕易進入細胞。一旦進入細胞內，即被其內酯酶剪切生成不具膜滲透性的Fura-2，從而滯留在胞內以發(fā)揮相應生理功能。本品以凍干粉的形式提供，使用時只需經無水DMSO充分溶解，配置成1~5mM的儲存液，并稀釋到合適的工作濃度即可。進行細胞內Ca²⁺檢測，Fura-2, AM的常用濃度為0.5~5μM。

產品特性

Fura-2, AM激發(fā)光譜圖

Description：Fluorescence excitation spectra of fura-2 (MX4502) in solutions containing 0–39.8 µM free Ca²⁺.

保存與運輸方法

保存：-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2） 乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后請在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3） Fura-2, AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內，可在20-25℃溫育片刻至全部融解后使用。

4） Fura-2, AM第一次使用，建議儲存液現(xiàn)配現(xiàn)用，分裝成單次用量，嚴格做到≤-20℃密封干燥凍存，以防止受潮。為了保證良好的實驗效果，盡量在短時間內使用。

5） Fura-2, AM具有相對較強的抗光淬滅能力，細胞孵育后1h內觀察，都不會因熒光泄露和光漂白作用導致測定結果發(fā)生明顯變化。

6） Fura-2不適合用激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀檢測，因很難用它們完成激發(fā)光譜的快速轉換。

7） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 試劑準備

1） 配制Pluronic F-127母液： 稱取100mg Pluronic F-127粉末（貨號：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存，不用冷藏。如有結晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理緩沖液

B，操作步驟

1） 用無水DMSO溶解Fura-2, AM配制成1-5mM的儲存液，或將已配好的Fura-2, AM儲存液取出于室溫回溫。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fura-2, AM中加入12.5µl 無水DMSO）。準備Fura-2, AM工作液之前，有時需要往Fura-2, AM儲存液中加入適量的20% Pluronic F-127溶液，以增強AM探針的水溶性。

【注①】：Fura-2, AM染色工作液制備前，添加等體積20% Pluronic F-127溶液到Fura-2, AM+DMSO儲存液，從而使Pluronic F-127的最終工作濃度約為0.02%。

【注②】：Pluronic F-127可以防止AM探針在溶液中聚合并促使探針更好進入細胞。但Pluronic F-127可降低AM探針的穩(wěn)定性，因此只建議在配制工作液時加入，不建議加入儲存液長期保存。

2） 用HHBS或其他生理緩沖液將 Fura-2, AM+DMSO儲存液稀釋到0.1-5µM的工作液。

【注①】：Fura-2, AM應用在大部分細胞的推薦加載濃度為4-5µM，具體的使用濃度需根據(jù)實驗要求進行優(yōu)化。為了避免過度加載造成細胞毒性，建議在取得有效結果的基礎上盡量使用zui低探針濃度。

【注②】：Fura-2, AM工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復凍存。

3） 【可選】如果細胞內含有機陰離子轉運體，丙huang舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone， 0.1-0.25mM）可能需要加入細胞培養(yǎng)基內，以降低去酯化探針的泄露水平。

【注①】：丙huang舒或磺吡酮儲存液相當偏堿，因此加入培養(yǎng)基后需要重新調整pH。

4） 將準備好的Fura-2, AM染色工作液加入細胞，加入量以覆蓋細胞為準。37℃孵育20-60min。

【注①】：若使用含血清的培養(yǎng)基，血清內酯酶會降解AM，從而降低Fura-2, AM加載效果。而含酚紅培養(yǎng)基會使本底值略偏高，建議加入染色工作液前，對細胞清洗2~3次。

【注②】：關于孵育的時間，如果shou次做實驗不能確定，建議先孵育30min，看熒光效果；如果細胞死亡較多，適當縮短時間；如果熒光強度太弱，適當延長時間。

【注③】：降低探針加載溫度可能會降低探針的區(qū)室化現(xiàn)象。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理緩沖液（如有必要，使用含轉運體抑制劑如2.5mM丙磺酸的緩沖液）清洗細胞1~2次，以去除殘留探針。

6） 37℃再孵育30min以保證細胞內AM的完quan去酯化。

7） 用熒光顯微鏡、熒光分光光度計或其他熒光檢測設備，根據(jù)實驗要求選擇合適的波長進行檢測。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產品。