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核酸凝膠染料

核酸凝膠染料

簡要描述:

核酸凝膠染料適用范圍廣:可選擇電泳前染色(膠染法)或電泳后染色(泡染法);適用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳;可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。

產(chǎn)品時間:2024-03-21

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MKRed(效果同GelRed)核酸染料(10,000× 水溶液)

MKRed核酸凝膠染料特點

● 無毒性:MKRed *的油性和大分子量特點使其不能穿透細胞膜進入細胞內(nèi),艾姆斯氏試驗結(jié)果也表明,該染料的誘變性遠遠小于EB。

● 靈敏度高:適用于各種大小片段的電泳染色,對核酸遷移的影響小于SYBR Green I。

● 穩(wěn)定性高: 適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠;室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩(wěn)定,耐光性強。

● 信噪比高:樣品熒光信號強,背景信號低。

● 操作簡單:與 EB 一樣,在預(yù)制膠和電泳過程中染料不降解;而電泳后染色過程也只需30 分鐘且無需脫色或沖洗 ,即可直接用紫外凝膠透射儀觀察。

● 與EB有相同的光譜特性,無需改變?yōu)V光片及觀察裝置:標準的 EB 濾光片或 SYBR 濾光片都適用,使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可,在 300nm 紫外光附近可得到zui激發(fā)。但是MKRed不能被488 nm氬離子激光器或相似波長的可見光*激發(fā),因此不推薦使用此類激發(fā)裝置的成像系統(tǒng)。對于此類裝置,我們推薦您使用DuGreen(Cat# 011或012),它和SYBR Green I的光譜相似,靈敏度相當,但更加穩(wěn)定。


核酸凝膠染料使用方法簡介

1.膠染法(用法同EB)(推薦方法)

(1) 制膠時加入MKRed 核酸染料(例如:每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL MKRed 10,000× 儲液,

以此比例類推)。

(2) 按照常規(guī)方法進行電泳。

注意事項:

♦ 此方法染色染料用量相對較少。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。

♦ 由于MKRed具有良好的熱穩(wěn)定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。搖晃,振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將MKRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中,然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。MKRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。

♦ 如果總是看到條帶彌散或分離不理想,建議使用泡染法染色以確認問題是否與染料有關(guān)。如果染色后問題依舊存在,則說明問題與染料無關(guān),請嘗試:降低瓊脂糖濃度;選用更長的凝膠;延長凝膠時間以保證邊緣清晰;改進上樣技巧或選擇泡染法染色。

♦ 此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠,對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。

2.泡染法

(1) 按照常規(guī)方法進行電泳。

(2) 用H2O將MKRed 10,000× 儲液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中,制成3× 染色液。(例如將15μL MKRed 10,000× 儲液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。

(3) 將凝膠小心地放入合適的容器中,如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右,zui合適染色時間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5~10%丙烯酰胺的凝膠,染色時間通常介于30min到1h,并隨丙烯酰胺含量增加而延長。

注意事項:

♦ 用泡染法染色時,染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。

♦ 3× MKRed染色液可以大量制備,在室溫下避光保存直至用完。

幾種核酸染料比較

名稱

靈敏度

穩(wěn)定性

對DNA 遷移的影響

安全性

適用性

MKRed

條帶不彎曲,DNA片段不遷移

  • 是一種*的油性大分子,不易揮發(fā)升華,不易吸入人體,不能穿透細胞膜進入活體細胞內(nèi),安全無毒。
  • 艾姆斯氏測試結(jié)果表明,MKRed在凝膠染色濃度下*沒有誘變性,因此*沒有致癌毒性。

通用大小片段電泳染色,與EB有相同的光譜特性,無需改變?yōu)V光片及觀察裝置。標準的EB濾光片或SYBR濾光片都適用,使用普通紫外凝膠透射儀觀察即可,在300nm紫外光附近可得到zui激發(fā)。

MKGreen

條帶不彎曲,DNA片段不遷移

①  是一種*的油性大分子,不易揮發(fā)升華,不易吸入人體,不能穿透細胞膜進入活體細胞內(nèi),安全無毒。
②  艾姆斯氏測試結(jié)果表明,DuGreen在凝膠染色濃度下*沒有誘變性,因此*沒有致癌毒性。

通用大小片段電泳染色,適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。

SYBR Green I

染料濃度較高時,條帶容易彎曲,DNA片段遷移的現(xiàn)象明顯

屬花箐染料,能透過細胞膜進入活體細胞內(nèi),但容易生物降解,不會在體內(nèi)殘留,安全無毒。

100bp以上電泳染色,適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。

EB

條帶不彎曲,DNA片段不遷移

①  分子量小,易揮發(fā)升華,易吸入人體,不易生物降解,在體內(nèi)長期殘留。
②  艾姆斯氏測試結(jié)果表明,EB容易引起有機體突變,是一種強誘變劑,具有高致癌性。

100bp以上電泳染色,背景熒光信號高;使用普通紫外凝膠透射儀觀察。

Goldview

條帶不彎曲,DNA片段不遷移

①  主要成分為吖啶橙,是一種煤焦油提取物,具有高毒,致癌,高誘變性。
②  易揮發(fā)升華,易吸入人體,能穿透細胞膜進入活體細胞內(nèi),不易生物降解,在體內(nèi)長期殘留。

100bp以上電泳染色,背景熒光信號高;適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。

 

特別提醒:

♦ 如果您使用的是紫外成像儀,請選擇MKRed;如果您使用激光成像儀或希望在可見光下觀測,請選擇 MKGreen。

♦ 在極少數(shù)情況下,質(zhì)粒經(jīng)某些酶切后的DNA樣品會出現(xiàn)拖尾和分辨率降低,此時建議同時嘗試兩種染色方法以決定哪種方法更加合適。

訂購信息:

品名

產(chǎn)地

貨號

規(guī)格

單價

備注

MKRed(10,000× 水溶液)

MKbio

MF0754-500UL

500ul

460

現(xiàn)貨

 

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