AO/EB Double Staining Kit AO/EB雙染試劑盒

關鍵詞：

吖啶橙（Acridine Orange，AO）；溴化乙錠（Ethidium Bromide, EB）；Apoptotic cell 凋亡細胞；Necrotic cells壞死細胞；Annexin V/PI 細胞凋亡雙染；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一種異染的核酸結合染料，具細胞膜滲透性，通過插入或靜電吸引的方式與DNA或RNA結合。當與雙鏈DNA（dsDNA）結合發(fā)射綠色熒光（Ex/Em=502/525nm），與單鏈DNA（ssDNA）或RNA結合發(fā)射紅色熒光（Ex/Em=460/650nm），少量結合呈橙紅色熒光。溴化乙錠（Ethidium Bromide, EB）是一種多環(huán)芳烴熒光小分子和核酸插入劑，嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對內(nèi)，無堿基特異性，呈紅色熒光（（Ex/Em=518/605nm）。EB不具細胞膜滲透性。

吖啶橙（AO）和溴化乙錠（EB）常常聯(lián)合使用來觀察細胞核變化和凋亡小體形成，這些都是凋亡的特征。兩者結合能區(qū)分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞。工作原理在于吖啶橙能同時染活細胞和死細胞，EB只能對喪失膜完整性的細胞進行染色。活細胞呈均勻的綠色。早期凋亡細胞呈綠色，并且在細胞核能看到亮綠色的點，由于染色體濃縮和核斷裂。晚期凋亡細胞也會被EB著色，從而染成橙紅色，但，與壞死細胞相比，晚期凋亡細胞會有濃縮和常常斷裂的核。壞死細胞也被染成橙紅色，但會有和活細胞相似的核形態(tài)，沒有濃縮的染色體。

我司（懋康生物）提供的AO/EB雙染試劑盒（AO/EB Double Staining Kit）提供完整的試劑，操作簡單，根據(jù)說明書操作能做100個反應。

產(chǎn)品包裝

注意事項

1）AO與EB都有一定毒性，請小心操作。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 染色工作液的制備

于正式實驗前，取吖啶橙染液（試劑A）、溴化乙錠染液（試劑B）、稀釋緩沖液（試劑C），按照A:B:C=1:1:8的比例稀釋成所需的AO/EB染色工作液。

2. 細胞準備

貼壁細胞：按照常規(guī)方法消化。于1000rpm離心5min，收集細胞沉淀，用PBS清洗一次。

懸浮細胞：于1000rpm離心5min，收集細胞沉淀，用PBS清洗一次。

之后用稀釋緩沖液（試劑C）重懸細胞，細胞計數(shù)，調整細胞密度為0.5-5×10⁶個/ml。

3. 染色

每25μl細胞懸液中，加入2μl 新鮮制備的AO/EB染色工作液，輕輕混合均勻。室溫孵育5~10min。

4. 觀察

取干凈載玻片，滴加5~10μl 染色的細胞懸液，蓋上蓋玻片。使用熒光顯微鏡的熒光素濾片和60倍放大的物鏡來觀察和計數(shù)。該測定至少重復三次，每次觀察的總細胞至少100個。

【注意】：根據(jù)細胞類型選擇理想的物鏡放大倍數(shù)（更高或更低），前提是必須看清核形態(tài)。

應用示例（來自文獻）：

文獻：Dual AO/EB Staining to Detect Apoptosis in Osteosarcoma Cells Compared with Flow Cytometry.

染色方法：Dual fluorescent staining solution (1 μl) containing 100 μg/ml AO and 100 μg/ml EB (AO/EB) was added to each suspension and then covered with a coverslip. The morphology of apoptotic cells was examined and 500 cells were counted within 20 min using a fluorescent microscope (OLYMPUS). Dual acridine orange/ethidium bromide (AO/EB) staining method was repeated 3 times at least.

Fig. (A) 陰性對照細胞（正常細胞）：環(huán)形細胞核均勻分布在細胞中央。(B)實驗組 (早期凋亡細胞): 吖啶橙（AO）染色后的細胞核呈黃綠色熒光，以月牙形或顆粒的形態(tài)聚集位于細胞的一邊。(C) 實驗組 (晚期凋亡細胞): 經(jīng)EB染色后的細胞核呈橙紅熒光，集中聚集且偏重定位。(D) 壞死細胞：壞死細胞體積增加，顯示平整的橙紅色熒光和不清晰的輪廓。細胞正要溶解或接近崩潰。

相關產(chǎn)品

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產(chǎn)品。

AO/EB雙染試劑盒 細胞增值

AO/EB雙染試劑盒 細胞增值