Dispase II 分散酶II（中性蛋白mei）

產品信息

產品描述

中性蛋白mei（Neutral protease），商業(yè)名稱Dispase II，也稱分散酶II，普遍用于不同組織和器官中的細胞分離。Dispase II是一種非特異性金屬蛋白酶，能快速有效且溫和的破壞組織細胞外基質釋放單細胞培養(yǎng)物（原代細胞培養(yǎng)物）或收集已培養(yǎng)的細胞將其轉移到新的培養(yǎng)基質上（傳代培養(yǎng)）。另外，還能預防懸浮細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生的成團現象。Dispase II極其穩(wěn)定，不會受溫度、pH和血清內容物的干擾；通過螯合劑或稀釋很容易失活；酶活溫和，對細胞損傷小，可良好維持細胞膜完整性。

本品來源于多粘芽孢桿菌（Bacillus polymyxa），無支原體或其他動物病毒污染。以非無菌的凍干粉形式提供，比活力≥0.8 U/mg蛋白，使用前需進行除菌。常用工作濃度范圍為0.6-2.4 U/ml。

產品特性

1）  EC NO：3.4.24.4

2）  同義名：Neutral protease中性蛋白mei

3）  比活力：≥0.8 U/mg protein (37℃, casein as substrate, pH 7.5)

4）  酶活力單位定義：在37℃，pH 7.5的反應條件下，1min內釋放福林酚陽性反應氨基酸和多肽量相當于1 μmol (181 μg)酪氨suan所需的酶量即為一個活力單位。

5）  pH：6.0 - 8.5

6）  激活劑：Ca2+為2mM，該酶已含足量Ca2+確保酶活力。

7）  抑制劑： EDTA, EGTA, Hg2+,以及其他重金屬。該酶活性不受血清干擾。

保存與運輸方法

保存：2-8℃干燥保存，至少1年有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

一、儲存液和工作液制備

1）儲存液制備：用Hepe緩沖鹽溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl）溶解Dispase II凍干粉，配制成10mg/ml的儲存液，用0.22µM濾膜過濾除菌。本儲存液置于2-8℃，2周穩(wěn)定；根據單次用量分裝凍存，高達2個月穩(wěn)定，避免反復凍融。

2）工作液制備：使用時用合適的細胞培養(yǎng)液將儲存液稀釋到工作液濃度即可，常用工作濃度為0.6-2.4 U/ml。不推薦使用>2.4 U/ml的工作濃度。具體使用濃度請根據自身實驗體系或參考文獻來調整。

二、組織分離

1）用無菌手術刀或剪刀將組織切成3-4mm小片，之后用無菌PBS緩沖液清洗組織片幾次；

2）用Dispase II工作液（0.6-2.4 U/ml）浸沒并37℃孵育進行組織解離；

3）置于水平搖床上，低速轉動，37℃孵育直至組織完quan解離；【注意】：第一次使用Dispase II，通過細胞計數來確定總反應時間。對于堅硬致密組織需要1h的孵育時間，不過孵育時間幾小時也不會有副作用。

4）若有需要，將消化產物用無菌不銹鋼網過篩，從而分離解散細胞和殘留組織，或當更大片段組織靜置到管底，輕輕倒出上層細胞。若需要進一步解離，則加入新鮮的Dispase II工作液到殘留組織。

5）低速離心收集細胞，吸掉酶工作液；

6）用適當的細胞培養(yǎng)液重懸細胞，置于正常預優(yōu)化條件下培養(yǎng)。

三、細胞亞培養(yǎng)

1）用37℃預熱的Dispase II工作液完quan覆蓋細胞，置于37℃孵育5min；

2）吸掉溶液，于37℃再孵育10min；

3）顯微鏡觀察以確定消化情況，若有需要，可再孵育15min；

4）用細胞培養(yǎng)液重懸細胞，低速離心并用培養(yǎng)基清洗細胞幾次；

5）用新鮮細胞培養(yǎng)液重懸細胞；

6）按照常規(guī)方法進行分盤傳代。

注意事項

1）Dispase是Godo Shusei Co., Ltd.的注冊商標。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產品。