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大腸桿菌化學感受態細胞表達分析

大腸桿菌化學感受態細胞表達分析

簡要描述:

大腸桿菌化學感受態細胞表達分析BL21 Star (DE3) pLysS菌株來源于BL21(DE3)菌株。DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體(其上攜帶lacUV5啟動子調控的T7 RNA聚合酶基因),IPTG用來誘導T7 RNA聚合酶的表達。

產品時間:2024-12-16

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BL21 Star (DE3) pLysS Chemically Competent Cell 

大腸桿菌化學感受態細胞

 

產品標簽:

BL21 Star (DE3) pLysS;Rosetta (DE3);BL21 (DE3);表達感受態細胞;pET表達載體;IPTG誘導;非毒性蛋白表達;

 

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產品名稱

規格

價格(元)    

MF2335-1000UL  

BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大腸桿菌感受態細胞    

10×100μl       

450

MF2335-5000UL

BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大腸桿菌感受態細胞

50×100μl

1880



【好消息】:見我司整理的BL21系列表達感受態細胞常見問題


 

產品組分:

組分編號

組分名稱

貨號(規格)

MF2335-1000UL    

MF2335-5000UL    

MF2335-A    

BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell     

10×100μl

50×100μl

MF2335-B

Control Plasmid puC19, 10 pg/μl

10μl

10μl


菌株描述

BL21 Star (DE3) pLysS菌株來源于BL21(DE3)菌株。DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體(其上攜帶lacUV5啟動子調控的T7 RNA聚合酶基因),IPTG用來誘導T7 RNA聚合酶的表達。該菌株含突變的rne基因(rne131),編碼合成截短的RNase E,此酶喪失mRNA水解能力從而提高mRNA轉錄體的穩定性并增加異源蛋白產量。作為大腸桿菌B/r菌株,不含有lon蛋白酶和缺乏外膜蛋白酶OmpT,降低了外源蛋白的降解。


BL21 Star (DE3) pLysS菌株攜帶pLys質粒,具有氯mei素抗性(CamR)。含有表達T7溶jun酶的基因,T7溶jun酶能夠作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,從而能夠降低目的基因的背景表達水平,但不干擾IPTG誘導的表達。pLys質粒還含有p15A復制起始子,這一起始子使其兼容于pUC或pBR322來源的質粒。


BL21 Star (DE3) pLysS菌株特別設計適用于高拷貝、T7啟動子表達載體(比如pRSET T7載體)的非毒性蛋白的高水平表達。與BL21菌株相比,BL21 Star菌株由于提高的mRNA穩定性,呈現出更高的異源基因基礎表達,因此不適合毒性蛋白表達。然而,BL21 Star (DE3) pLysS菌株比BL21 Star菌株表達更低。


BL21 Star (DE3) pLysS菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm rne131(DE3) pLysS (CamR)


產品描述

本品是大腸桿菌BL21 Star (DE3) pLysS菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞,可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率可達107 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

 

保存與運輸條件

保存:-80℃保存,六個月有效。

運輸:干冰運輸。

 

注意事項

1)   感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存,不可反復凍融且放置時間過長,否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2)   最好在冰上融化感受態細胞。

3)   進行轉化操作時,需在相應溫度及無菌條件下進行。

4)   為防止轉化實驗不成功,可保留部分連接反應液以重新轉化,將損失降到zui低。

5)   產品包裝內含質粒pUC19 DNA(10pg/μl),供對照實驗用。

6)   BL21 Star (DE3) pLysS菌株攜帶pLysS質粒,除復蘇培養基不含抗生素之外,其他所用培養基、培養液都應含有氯mei素(34μg/ml),以防止質粒丟失。

7)   為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1)  從-80℃冰箱取出取感受態細胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌塊融化,加入目的DNA,用手輕彈管底輕輕混勻,冰浴靜置25min。

2)   42℃熱激45s,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。

3)   向每個離心管中加700 μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃ 搖床,200 rpm振蕩培養60min,目的使質粒上相關的抗性標記基因表達,使菌體復蘇。

4)   低速離心收菌(比如4000rpm,2min),留取100μl左右上清,用槍輕輕吹打重懸菌塊,之后加到含氯mei素(34μg/ml)以及所選質粒篩選抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于室溫(或37℃)直至液體被吸收,倒置培養,37℃培養12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多,可不用離心,直接取少量轉化產物涂布平板;反之,若轉化的DNA總量較少,則通過離心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培養液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b)新制備的固體培養基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。


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貨號

名稱

規格             

MF2331-1000UL      

BL21 (DE3) Competent Cell大腸桿菌感受態細胞

10×100μl

MF2332-1000UL

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell大腸桿菌感受態細胞

10×100μl

MF2333-1000UL

Rosetta (DE3) Competent Cell大腸桿菌感受態細胞

10×100μl

MF2341-1000UL

Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell大腸桿菌感受態細胞   

10×100μl

MF2339-1000UL

Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell大腸桿菌感受態細胞

10×100μl

MF2340-1000UL

Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell大腸桿菌感受態細胞

10×100μl

MF2334-1000UL

BL21 Star (DE3) Competent Cell大腸桿菌感受態細胞

10×100μl

MF2335-1000UL

BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大腸桿菌感受態細胞

10×100μl

MS0023-25G

Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸鏈mei素

25g

MS0021-10G

Chloramphenicol, USP Grade氯mei素

10g

MS0018-10G

Ampicillin, Sodium Salt氨芐青mei素鈉

10g

MS0017-5G

Carbenicillin, Disodium Salt羧芐青mei素二鈉鹽

5g

MS0019-10G

Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素

10g

MS0014-1G

Rifampicin, USP Grade利fu平

1g

 



 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 

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